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總蛋白測(cè)定試劑盒(雙縮脲法)試劑空白吸光度(空白吸光度)檢測(cè)項(xiàng)目報(bào)價(jià)???解決方案???檢測(cè)周期???樣品要求? |
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總蛋白測(cè)定是臨床生化檢驗(yàn)中的常規(guī)項(xiàng)目,其檢測(cè)結(jié)果對(duì)評(píng)估肝功能、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及腎臟疾病具有重要意義。雙縮脲法作為一種經(jīng)典的蛋白定量方法,憑借其操作簡(jiǎn)便、特異性高和成本低廉的特點(diǎn),在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用。試劑空白吸光度(空白吸光度)是該方法質(zhì)量控制的關(guān)鍵參數(shù),反映了試劑本身的背景干擾水平。通過(guò)測(cè)定空白吸光度,可排除試劑中顯色物質(zhì)、雜質(zhì)或保存條件變化對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾,確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。尤其在試劑批次更換或儀器校準(zhǔn)過(guò)程中,空白吸光度的監(jiān)測(cè)尤為重要。
試劑空白吸光度檢測(cè)的核心目標(biāo)是量化試劑本身在特定波長(zhǎng)下的吸光值。主要關(guān)注以下參數(shù):
1. 空白吸光度絕對(duì)值:在540nm波長(zhǎng)下,試劑與去離子水混合后的吸光值,通常要求≤0.15(具體標(biāo)準(zhǔn)因試劑品牌而異);
2. 批次間差異:不同生產(chǎn)批次的試劑空白吸光度波動(dòng)范圍;
3. 穩(wěn)定性驗(yàn)證:試劑開封后隨時(shí)間推移的空白吸光度變化趨勢(shì)。
檢測(cè)過(guò)程需依賴儀器設(shè)備:
- 分光光度計(jì):需具備540nm波長(zhǎng)檢測(cè)功能,光路系統(tǒng)需定期校準(zhǔn);
- 恒溫孵育系統(tǒng):控制反應(yīng)溫度于37±0.5℃(部分試劑要求室溫反應(yīng));
- 精密移液器:建議使用±1%精度的微量移液器;
- 比色皿:光徑1cm的石英或光學(xué)玻璃比色皿,需無(wú)劃痕、清潔無(wú)污染。
依據(jù)《WS/T 347-2011 雙縮脲法測(cè)定血清總蛋白》標(biāo)準(zhǔn),空白吸光度檢測(cè)流程如下:
1. 試劑準(zhǔn)備:將試劑恢復(fù)至室溫,按說(shuō)明書比例與去離子水混合;
2. 空白管設(shè)置:取3ml工作試劑加入比色皿,以去離子水為參比;
3. 儀器校準(zhǔn):預(yù)熱分光光度計(jì)30分鐘,測(cè)試前用參比液調(diào)零;
4. 吸光度測(cè)定:在540nm波長(zhǎng)下連續(xù)讀取3次吸光值,取均值作為終結(jié)果;
5. 數(shù)據(jù)記錄:記錄環(huán)境溫度、試劑批號(hào)及儀器型號(hào)等關(guān)聯(lián)信息。
根據(jù)行業(yè)規(guī)范,合格標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)滿足:
- 基線吸光度:未加樣本時(shí)吸光值應(yīng)≤0.15(具體參考試劑說(shuō)明書);
- 重復(fù)性要求:同一試劑三次測(cè)定結(jié)果差異應(yīng)<±0.02;
- 異常處理:若空白吸光度超過(guò)閾值,需排查試劑變質(zhì)、比色皿污染或儀器故障等因素。部分高靈敏度試劑可能要求更嚴(yán)格的≤0.10標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)際檢測(cè)中需注意:
- 試劑儲(chǔ)存異常:避光不當(dāng)可能導(dǎo)致顯色劑分解,需檢查試劑外觀;
- 水質(zhì)不合格:建議使用新鮮制備的超純水(電阻率≥18.2MΩ·cm);
- 儀器基線漂移:可通過(guò)重復(fù)調(diào)零或更換光源燈管進(jìn)行校正;
- 操作誤差:需嚴(yán)格統(tǒng)一比色皿裝入液量(建議使用定量加樣器)。