動物、動物組織及血清偽狂犬病抗原檢測

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動物、動物組織及血清偽狂犬病抗原檢測的意義與背景

偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，主要感染豬、牛、羊等家畜及部分野生動物，對養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失。該病毒可通過直接接觸、空氣傳播或垂直傳播擴散，且潛伏期短、致死率高。為有效防控疫情，快速、準(zhǔn)確地檢測動物及其組織、血清中的PRV抗原至關(guān)重要。抗原檢測不僅能早期發(fā)現(xiàn)感染個體，還能為疫苗免疫效果評估、流行病學(xué)調(diào)查及凈化方案制定提供科學(xué)依據(jù)。

檢測項目與樣品類型

偽狂犬病抗原檢測的主要對象包括活體動物的鼻腔拭子、腦組織、扁桃體、淋巴結(jié)等組織樣本，以及血清中的病毒抗原。檢測項目通常分為以下兩類：
1. 直接抗原檢測：針對病毒特異性蛋白（如gB、gE糖蛋白）或病毒核酸的檢測；
2. 病毒分離培養(yǎng)：通過細(xì)胞培養(yǎng)法分離活病毒，適用于確診及毒株鑒定。

常用檢測儀器與設(shè)備

根據(jù)檢測方法不同，需配備以下儀器：
- PCR儀：用于熒光定量PCR（qPCR）或常規(guī)PCR擴增病毒DNA；
- 酶標(biāo)儀：配合ELISA試劑盒檢測抗原抗體復(fù)合物；
- 熒光顯微鏡：觀察免疫熒光染色結(jié)果；
- 細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：用于病毒分離的PK-15或Vero細(xì)胞系；
- 電泳儀：分析PCR產(chǎn)物條帶。

核心檢測方法

目前主流的PRV抗原檢測技術(shù)包括：
1. 免疫學(xué)方法：
- 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：利用單克隆抗體捕獲樣本中的病毒抗原，靈敏度高，適用于批量篩查；
- 免疫熒光法（IFA）：通過熒光標(biāo)記抗體直接定位組織切片中的病毒抗原。
2. 分子生物學(xué)方法：
- 實時熒光定量PCR（qPCR）：針對PRV gB或gE基因設(shè)計引物，可定量檢測病毒載量；
- 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）：無需復(fù)雜設(shè)備，適合現(xiàn)場快速檢測。
3. 病毒分離法：將樣本接種敏感細(xì)胞系，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）后通過PCR或電鏡確認(rèn)。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

與國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)主要參考以下文件：
- OIE《陸生動物診斷試驗手冊》：規(guī)定病毒分離、PCR及ELISA的操作規(guī)范；
- GB/T 18641-2020（中國標(biāo)準(zhǔn)）：明確偽狂犬病診斷技術(shù)；
- NY/T 541-2023（農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）：規(guī)范動物疫病實驗室檢測流程。
質(zhì)量控制需注意：
- 樣本采集后應(yīng)低溫保存并盡快檢測；
- 實驗需設(shè)置陽性對照（PRV標(biāo)準(zhǔn)毒株）和陰性對照；
- 分子檢測需防止污染，實驗區(qū)域嚴(yán)格分區(qū)。

結(jié)果判定與臨床意義

陽性判定標(biāo)準(zhǔn)因方法而異：
- ELISA：樣本OD值/陰性對照OD值≥2.1；
- qPCR：Ct值≤35且出現(xiàn)特異性擴增曲線；
- 病毒分離：細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)典型CPE并經(jīng)PCR驗證。
陽性結(jié)果表明動物處于急性感染期或病毒攜帶狀態(tài)，需立即隔離并啟動生物安全措施。陰性結(jié)果需結(jié)合臨床表現(xiàn)及流行病學(xué)史綜合判斷，必要時重復(fù)檢測。